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如何构建载体

载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。 ②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。 理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。 具体过程详解如下图所示:

在RNA干扰实验中 首先需要构建dsRNA表达载体 将这种载体导入受体细胞中后 表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA 引起具有相同序列的mRNA发生讲解 导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质 所以个体会表现出功能缺失表型 构建表达载体通常选用dsR...

构建表达载体首先取决于你的实验目的,例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白,载体上面的标签决定了你的纯化方法,当然也决定了实验成本,等等一系列需求。 拿带标签的载体为例,因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性,也为纯化带...

一般构建载体时,会将目的基因和载体用相同的内切酶切出一定的序列,再用连接酶连接而成;所以想切掉目的基因很简单,就是再用之前的内切酶进行切除就好了。

标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否,或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如:某种具有氨苄抗性基因质粒(该基因即可认为标记基因),与外源DNA...

首先根据你的实验需要选择相应的载体 其次分析你的基因序列以及载体序列上的酶切位点,切记在载体上所选择的酶切位点要和你的基因序列上相一致,并且这两个酶切位点在你的基因序列中并不存在,否则会将基因切断 再次就是对基因和载体进行酶切了...

先看表达载体有哪些合适的酶切位点,比如NdeI,NcoI这样识别序列有ATG起始密码子的,再看看目的基因含不含有这些位点,含有就不好连接了,挑好位点,计算下读码框是否正确,保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。下游...

基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体, 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口...

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切,然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上,再从过度载体抢切下目的基因,最后再连接到酶切过的表达载体上。

构建了能表达miRNA前体的慢病毒载体,目前能提供人类全基因组miRNA前体的表达载体。U6启动子驱动包括前体茎环(stem-loop)结构和前体上下游各100-150个碱基的基因组序列的miRNA前体转录,随后通过RNAi的酶系加工产生成熟的miRNA。载体上还含有p...

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